
廣州市黃埔區學(xué)大道攬月路廣州企業(yè)孵化器B座402
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QQ:386244141
項目名稱(chēng):Co-IP
所屬分類(lèi):IP類(lèi)實(shí)驗
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技術(shù)服務(wù)描述
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗體和抗原之間的專(zhuān)一性作用為基礎的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。
其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細胞內存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來(lái)。目前多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應后,beads上的prorein A就能吸附抗原達到精制的目的。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
其優(yōu)點(diǎn)為:(1)相互作用的蛋白質(zhì)都是經(jīng)翻譯后修飾的,處于天然狀態(tài);(2)蛋白的相互作用是在自然狀態(tài)下進(jìn)行的,可以避免人為的影響;(3)可以分離得到天然狀態(tài)的相互作用蛋白復合物。缺點(diǎn)為:(1)可能檢測不到低親和力和瞬間的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用;(2)兩種蛋白質(zhì)的結合可能不是直接結合,而可能有第三者在中間起橋梁作用;(3)必須在實(shí)驗前預測目的蛋白是什么,以選擇最后檢測的抗體,所以,若預測不正確,實(shí)驗就得不到結果,方法本身具有冒險性。

服務(wù)流程
1. 樣本總蛋白提取及與特定抗體反應
2. 用Protein A/G捕獲特定的抗體-蛋白復合物
3. 洗滌去掉未被捕獲的蛋白,得到純蛋白抗體復合物
4. 通過(guò)Western-Blot檢測IP結果
5. 數據處理及Figure制作
客戶(hù)提供(實(shí)驗目的:研究Protein A與Protein B是否結合)
1. 目的蛋白信息(Protein A、Protein B)
2. 需檢測的細胞樣品(Protein A、Protein B均可表達,可不需陽(yáng)性樣)
3. 適用于IP的一抗(Protein A)及其說(shuō)明書(shū)
4. 適用于Western Blot的一抗(Protein B)及其說(shuō)明書(shū)
賽誠提供
1. 原始數據、結果圖片
2. 標準實(shí)驗報告
3. SCI標準Result Figure
