技術(shù)服務(wù)描述

Clip(crosslinking-immunprecipitation)染色質(zhì)免疫沉淀

Clip(crosslinking-immunprecipitation)染色質(zhì)免疫沉淀，是一項體內研究RNA分子與RNA結合蛋白相互作用的革命性技術(shù)。其主要原理是基于RNA與其相應的RNA結合蛋白會(huì )在紫外照射下會(huì )發(fā)生共價(jià)結合，以RNA結合蛋白的特異性抗體將RNA-蛋白復合物沉淀之后，回收其中的RNA片段，進(jìn)行qRT-PCR檢測或測序分析。最近，這項技術(shù)也被應用于microRNA的靶標鑒定。

服務(wù)優(yōu)勢

1經(jīng)紫外照射，細胞內的RNA與相應的RNA結合蛋白交聯(lián)，增強RNA與蛋白的結合能力

2可檢測多種RNA，如LncRNA、mRNA、microRNA。

3可通過(guò)mRNA的差異表達，檢測microRNA的靶標mRNA。

4 PAR-Clip可精確定位RNA與蛋白的結合位點(diǎn)。

服務(wù)內容

研究RNA與RNA結合蛋白的相互作用

研究microRNA的靶標mRNA

服務(wù)流程

1狀態(tài)良好的細胞在356nm的紫外燈下照射一定時(shí)間

2收集細胞，制成蛋白提取液

3磁珠與抗體孵育

4帶有抗體的磁珠與蛋白提取液孵育

5清洗磁珠，加Trizol提取RNA，進(jìn)行qRT-PCR或測序分析

Clip與RIP的區別

Clip與RIP的共同點(diǎn)：都是用于研究RNA與RNA結合蛋白互作的實(shí)驗方法

Clip的優(yōu)勢：Clip與RIP的實(shí)驗方法基本一致，Clip在細胞裂解前要經(jīng)過(guò)紫外的照射?；罴毎?jīng)紫外照射后，RNA與RNA結合蛋白會(huì )發(fā)生共價(jià)結合，結合能力強。而RIP細胞中的RNA與RNA結合蛋白通過(guò)氫鍵和范德華力結合，結合能力較弱。因此，RIP實(shí)驗的洗脫過(guò)程中，會(huì )損失大量的RNA，而Clip實(shí)驗有效的避免了這一點(diǎn)。

客戶(hù)提供

IP級別的蛋白抗體

所研究的細胞株

我們提供

qPCR原始數據及處理結果，測序分析原始數據及處理結果